人ELISA檢測試劑盒采用的是生物素雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法測定樣品中人檢測試劑盒的水平。向預先包被了人檢測試劑盒單克隆抗體的酶標孔中加入檢測試劑盒，溫育；溫育后，加入生物素標記的檢測試劑盒抗體，再與鏈霉親和素-HRP結合，形成免疫復合物，再經(jīng)過溫育和洗滌，去除未結合的酶，然后加入底物A、B，產(chǎn)生藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺與樣品中人檢測試劑盒的濃度呈正相關，試劑盒的合理操作尤為重要，以下是檢測試劑盒試驗操作要點。

為了確保實驗的成功大家有必要了解一下！

1、為避免交叉污染，要避免重復使用手中的吸頭和封板膜。

2、不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。

3、配制試劑時，要用旋渦混合儀混勻。加入孔內(nèi)的試劑，充分混勻?qū)y試結果尤為重要，使用微量振蕩器(使用zui低頻率)，如無微量振蕩器，可在反應前手工輕輕晃動酶標板1分鐘，例如做圓周動作，使加入孔中的反應液混勻。

4、各步驟加樣均應使用加樣器，并經(jīng)常校準其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內(nèi)，如標本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。

5、實驗用酶標儀應嚴格按使用說明書規(guī)范操作，并在使用前充分預熱。

6、手工洗板應注意：甩掉酶標板內(nèi)的液體；在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙，酶標板朝下用力拍幾次；將稀釋后的洗滌液至少0.35ml注入孔內(nèi)，浸泡1-2分鐘。根據(jù)需要，重復此過程數(shù)次。自動洗板：如果有自動洗板機，應在熟練使用后再用到正式實驗過程中。

7、底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。

8、每次試驗測定的同時做標準曲線。如標本中待測物質(zhì)含量過高（樣本OD值大于標準品孔zui高濃度的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定，計算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)（×n）。

9、嚴格按照說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準。

10、所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按生物廢棄物處理。終止液為2M硫酸，使用時必須注意安全。

11、從2-8℃取出的ELISA檢測試劑盒，在開啟試劑盒之前要室溫平衡至少30分鐘。酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。

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